項(xiàng)目文章｜單細(xì)胞測(cè)序揭秘美洲大蠊的“愛情密碼”

2024年3月，華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院昆蟲科學(xué)與技術(shù)研究所李勝教授團(tuán)隊(duì)在Science China Life Sciences期刊在線發(fā)表題為“Two sex pheromone receptors for sexual communication in the American cockroach”的研究論文。他們以美洲大蠊為研究對(duì)象，通過行為測(cè)定、性別-年齡特異性轉(zhuǎn)錄組、熒光原位雜交（FISH）和單細(xì)胞測(cè)序等技術(shù)，揭示了雌蟲兩種性信息素成分 (PB和PA) 通過兩種嗅覺受體 (OR53和OR100) 共同調(diào)控雄蟲求偶交配行為的嗅覺分子機(jī)制。

文章標(biāo)題：Two sex pheromone receptors for sexual communication in the?American cockroach

期刊名稱：Science China Life Sciences

研究對(duì)象：美洲大蠊觸角

研究方法：行為測(cè)定、性別-年齡特異性轉(zhuǎn)錄組、熒光原位雜交（FISH）和單細(xì)胞核測(cè)序；下游實(shí)驗(yàn)：昆蟲電生理學(xué)、果蠅遺傳學(xué)、RNAi實(shí)驗(yàn)

百邁客生物為該研究提供了轉(zhuǎn)錄組和單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析服務(wù)。

研究背景

性信息素在昆蟲求偶交配行為的化學(xué)通訊中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。美洲大蠊（Periplaneta americana）雌蟲主要釋放兩種揮發(fā)性性信息素periplanone-A（PA）和periplanone-B（PB），以往研究表明PB是主要的性信息素成分，而PA和PB的相互作用以及兩者在雄蟲求偶交配行為中的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。

實(shí)驗(yàn)材料

SnRNA-seq：羽化后（DAE）9天的美洲大蠊雄蟲觸角（n=1）；

Bulk RNA-seq：1、3、5、7、9 DAE的美洲大蠊雄蟲觸角（n=4），雄蟲（觸角、前足、頭部、口器、精巢和翅），雌蟲觸角（n=4）。

研究結(jié)果

1.PB能吸引性成熟的雄性，而PA能抵消PB的功能

研究團(tuán)隊(duì)使用Y型管嗅覺儀對(duì)不同日齡的雄蟲進(jìn)行了行為學(xué)測(cè)試，以觀察它們對(duì)PB和PA的反應(yīng)。此外，通過視頻記錄和分析，評(píng)估了雄蟲的交配行為。交配率在5 DAE時(shí)增加到近50%，6 DAE時(shí)增加到60%以上，此后緩慢而穩(wěn)定地積累（圖1A）。雄蟲對(duì)PB和PA的偏好測(cè)試結(jié)果反應(yīng)，PB是主要的性信息素成分，能夠顯著吸引雄蟲。而PA雖然單獨(dú)存在時(shí)不吸引雄蟲，但其存在能夠減弱PB的吸引作用（圖1B-D），表明PA可能在調(diào)節(jié)性行為中起到平衡作用。

通過單感器記錄（SSR）技術(shù)，研究人員探索了雄蟲對(duì)兩種性信息素成分PA和PB的響應(yīng)（圖1E-F）。研究人員，發(fā)現(xiàn)了兩種類型的感受器對(duì)PA和PB的響應(yīng)模式：類型1：對(duì)PA和PB兩者都有明顯的響應(yīng)，即產(chǎn)生了強(qiáng)烈的電生理動(dòng)作電位。類型2：僅對(duì)PB有強(qiáng)烈的響應(yīng)，而對(duì)PA的響應(yīng)較弱或沒有明顯響應(yīng)。結(jié)果表明，PA和PB可能作用于至少兩種不同的嗅覺受體神經(jīng)元（ORNs）或者在至少兩種類型的感器中共享嗅覺受體，以調(diào)節(jié)雄蟲的求偶交配行為。

2.OR53和OR100主要在性成熟雄性的觸角中表達(dá)

研究人員利用Bulk RNA測(cè)序技術(shù)分析了雄蟲不同組織中嗅覺受體基因的表達(dá)情況，并通過果蠅遺傳學(xué)方法，將美洲大蠊的嗅覺受體基因在果蠅中表達(dá)，以鑒定PA和PB的受體。通過RNA測(cè)序分析得到的嗅覺受體基因在不同組織（雄蟲觸角-MA、雌蟲觸角-FA、雄蟲前足-MF、雄蟲頭部-MH、雄蟲口器-MM、雄蟲精巢-MT和雄蟲翅-MW）和不同日齡中的表達(dá)水平（圖2A、2B），以及通過qPCR驗(yàn)證的OR53、OR100和ORco基因在雄蟲觸角中敲除fru或dsx基因后的表達(dá)水平（圖2C），以及經(jīng)過營養(yǎng)信號(hào)通路抑制劑處理后的表達(dá)水平變化（圖2D）。研究鑒定出OR53和OR100為PA/PB和PA的受體，并發(fā)現(xiàn)它們?cè)谛巯x觸角中的表達(dá)模式與行為測(cè)定結(jié)果相吻合，證實(shí)了這兩種受體在性信息素感知中的關(guān)鍵作用。

3.OR53和OR100分別是PB/PA和PA受體

研究人員利用UAS-OR53和UAS-OR100轉(zhuǎn)基因果蠅品系，通過RNAi實(shí)驗(yàn)敲除了美洲大蠊中的OR53和OR100基因，進(jìn)而研究這些嗅覺受體在求偶交配行為中的作用。敲除這些基因后對(duì)PA和PB反應(yīng)的SSR測(cè)試結(jié)果，敲低OR53的表達(dá)顯著削弱了ORN對(duì)PB的反應(yīng)，但對(duì)ORN對(duì)PA的反應(yīng)只有輕微的影響（圖3B）。OR53和OR100基因敲除對(duì)雄蟲行為選擇和交配率的影響（圖3D、3E）。敲除實(shí)驗(yàn)證實(shí)了OR53和OR100在性信息素感知和行為調(diào)控中的關(guān)鍵作用，特別是OR53在PB誘導(dǎo)的求偶交配行為中的重要性。OR100的敲除則表明PA可能通過OR100發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

4.OR53和OR100定位于兩種錐形感受器

研究人員利用FISH技術(shù)，觀察到OR53、OR100和ORco經(jīng)常在同一個(gè)感受器中表達(dá)，說明大多數(shù)基本感受器同時(shí)含有OR53和OR100的ORN。為了更系統(tǒng)地研究OR基因的表達(dá)，研究人員使用性成熟雄蟲的觸角進(jìn)行了單細(xì)胞測(cè)序。測(cè)定每簇細(xì)胞的基因表達(dá)水平，鑒定出Cluster 2為ORco高表達(dá)的ORN(圖4B)。進(jìn)一步分析Cluster 2細(xì)胞得到12個(gè)亞型(圖4C)。其中大部分感受器同時(shí)具有OR53和OR100兩種OR53 ORNs，而少數(shù)感受器僅具有OR53?ORNs。12個(gè)亞型中有4個(gè)同時(shí)表達(dá)OR53和OR100，可能對(duì)應(yīng)于主要的1-型感受器的ORNs。在2-亞型中，還發(fā)現(xiàn)了OR53的顯著表達(dá)亞型，可能對(duì)應(yīng)2型感受器的ORNs，也可能只有少量的感受器OR100?ORNs(圖4D)。這些結(jié)果進(jìn)一步支持了性成熟雄蟲觸角中至少存在兩種錐形感受器。

研究

研究結(jié)果表明，PB作為主要的性信息素成分，通過激活OR53受體來誘導(dǎo)雄蟲的求偶交配行為。而PA雖然單獨(dú)存在時(shí)不吸引雄蟲，但其存在能夠通過兩種可能的途徑減弱PB的吸引作用：一是PA與PB競(jìng)爭激活相同的受體OR53，二是PA通過激活其特定的受體OR100來抑制性行為。該研究確定了兩種性信息素嗅覺受體以及可能調(diào)控雄蟲特異性和年齡依賴性求偶交配行為的分子機(jī)制，有助于發(fā)展綠色防蟑技術(shù)及害蟲綜合管理策略。

參考文獻(xiàn)：

Li N, Dong R, Zeng H, et al. Two sex pheromone receptors for sexual communication in the American cockroach[J].?Sci China Life Sci, 2024,67(7):1455-1467.