操作步驟
1)將官網(wǎng)下載到的BSTViewer_project文件夾數(shù)據(jù)(或者通過運行BSTMatrix 得到的BSTViewer_project 文件夾)存放到英文命名的文件夾之中;【包括各個級別分辨率矩陣文件,及BMChiper 或者官網(wǎng)下載的HE 染色圖片】可以同時在此文件夾下邊新建一個outdir 作為文件輸出路徑;
2)運行“BSTViewer V3.0正式版-WIN-64\BSTViewer V3.0正式版\bin”目錄下的BSTViewer,點擊“創(chuàng)建項目”創(chuàng)建任務(wù),選擇1)中的文件夾outdir;

創(chuàng)建輸出目錄
3)導(dǎo)入HE圖片和矩陣文件。導(dǎo)入的HE圖片可以通過鼠標左鍵進行移動,滾輪可對圖片進行縮放;

導(dǎo)入HE圖片

導(dǎo)入矩陣
4)進行ROI 創(chuàng)建。點擊“ROI”按鈕,此處可以選擇全局聚類和部分區(qū)域聚類。cont和conts-all分別代表在全局下聚類與全局扣除空白區(qū)域聚類。區(qū)域聚類的話目前提供了“框選模式”和“矩形框選”兩種模式??蜻x合適的區(qū)域后點擊“結(jié)束一次選取”,選擇“保存或摳除”,完成之后點擊“保存ROI組”并命名即可;
5)點擊“Clustering”,選取自己感興趣的分辨率,和適當?shù)膮?shù),然后點擊“啟動聚類”;
LEVEL選擇:不同等級分辨率
最小基因數(shù):當單個spot中基因數(shù)少于這個數(shù)目則會被自動過濾掉;
最小spot組數(shù):單個基因需要表達的spot數(shù),少于這個數(shù)目該基因會被過濾掉;
RESOLUTION:聚類豐富度值,該數(shù)值越高cluster種類越多,推薦在0.5附近調(diào)整。

區(qū)域框選

區(qū)域聚類結(jié)果

全局聚類結(jié)果

摳除空白的全局聚類結(jié)果
6)最后得到框選到的感興趣區(qū)域的聚類結(jié)果,點擊“ROI”切換為“瀏覽模式”可以通
過鼠標滾輪進行縮放,查看結(jié)果;
7)聚類圖片可以在TOOLS欄中進行保存。點擊圖畫模式可以選擇“僅保存HE”和“HE&Cluster”分別進行保存。
結(jié)果路徑
1)cluster聚類結(jié)果保存在“outdir文件夾”中的“cluster”中。包含cluster聚類圖片、barcode信息、UMAP、tSNE聚類結(jié)果。
2)聚類過程中保存的HE圖片和cluster聚類圖片保存在“imgs”文件夾中。
3)選擇的區(qū)域聚類的矩陣文件保存在“subdata”文件夾中